Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:36 min. • July 8th, 2025
Comece com uma amostra de tecido cerebral humano post-mortem congelada de um caso confirmado de doença neurodegenerativa.
Consumir matéria cinzenta rica em agregados proteicos insolúveis, uma característica da doença.
Transfira o tecido para um homogeneizador.
Adicione um tampão contendo inibidores e homogeneize para liberar componentes intracelulares.
Os inibidores bloqueiam as enzimas protease e fosfatase, impedindo a degradação da proteína.
Transferir o homogeneizado para um tubo e adicionar um tampão detergente iónico. Incubar.
O detergente solubiliza proteínas dobradas nativamente, enquanto os agregados de proteínas mal dobrados permanecem intactos.
Sonicar para completar a dissociação celular.
Transferir o homogeneizado para um tubo de ultracentrifugação e centrifugar a alta velocidade.
Os agregados se depositam na parte inferior.
Remova o sobrenadante contendo proteínas solúveis em detergente.
Lave os agregados com um tampão detergente iônico, centrifugue e remova o sobrenadante.
Adicione tampão de ureia para desnaturar os agregados de proteínas, tornando-os solúveis.
Transferir os agregados de proteínas solubilizadas para um tubo e sonicar brevemente para assegurar a dissol
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