Gerando uma lesão por facada cortical em um modelo de camundongo para induzir astrogliose reativa

Prenda um mouse anestesiado em uma estrutura estereotáxica.

Raspe a cabeça e desinfete o local. Aplique pomada para os olhos para evitar o ressecamento da córnea.

Faça uma incisão para expor o crânio.

Remova as membranas sobrepostas e limpe a superfície com solução salina.

Marque uma região no crânio, visando o córtex.

Perfure ao longo da região marcada. Aplique solução salina para manter a hidratação dos tecidos.

Remova o pedaço de osso solto, expondo o córtex subjacente.

Coloque espuma de gel embebida em solução salina para evitar o ressecamento do tecido e absorver o sangue.

Posicione uma lâmina estéril presa a um suporte de sonda sobre o córtex. Em seguida, remova a espuma de gel.

Abaixe a lâmina para penetrar no córtex e mova-a horizontalmente em movimentos repetidos para criar uma lesão mecânica.

Remova a lâmina e use espuma de gel para absorver o sangue. Suturar a incisão cirúrgica.

No local da lesão, os astrócitos sofrem gliose reativa, onde se ativam e proliferam, liberando moléculas protetoras que reduzem a inflamação e auxiliam no reparo tecidual.

Nesta etapa, coloque um mouse totalmente sedado no quadro estereotáxico. Prenda o nariz no cone do nariz, que está conectado ao isoflurano. Em seguida, aperte as barras auriculares e certifique-se de que a cabeça esteja estável.

Raspe a cabeça do nível dos olhos ao nível da orelha. Em seguida, esterilize a pele com três esfoliações alternadas de álcool isopropílico e solução de iodo Betadine. Depois, aplique pomada em ambos os olhos para evitar que sequem.

Monitore a profundidade da anestesia do animal beliscando o dedo do pé ou a cauda. O camundongo está no plano cirúrgico apropriado quando não há resposta e a respiração é lenta e uniforme. Faça uma incisão na pele parassagital logo atrás dos olhos até quase o ponto entre as orelhas em um único corte firme. Mova a pele para o lado e corte o lado direito com um hemostático.

Sob o microscópio, limpe a membrana sobrejacente do crânio usando o lado opaco do bisturi e aplicadores com ponta de algodão. Em seguida, limpe o crânio com um aplicador com ponta de algodão embebido em solução salina a 0,9% e deixe secar completamente. Usando uma pequena régua e um marcador permanente, marque a borda anterior da craniotomia a 1 milímetro caudal à sutura coronal e, em seguida, marque a borda esquerda da craniotomia a 1 milímetro lateral à sutura sagital.

Em seguida, marque as bordas direita e caudal da craniotomia a 4 milímetros das suturas sagital e coronal, respectivamente. Usando uma broca de 0,5, perfure cuidadosamente o contorno do marcador permanente e certifique-se de não romper completamente o crânio. Pressione suavemente o pedaço isolado de osso parietal com uma pinça. O osso afinado está pronto para remoção quando estiver suficientemente fraco em todo o perímetro.

Agora, usando uma seringa de 10 mililitros equipada com uma agulha de calibre 23, aplique uma pequena quantidade de solução salina a 0,9% no osso isolado e na área perfurada. Fixe o braço manipulador ao aparelho estereotáxico. Em seguida, prenda uma nova lâmina de bisturi ao suporte da sonda com o lado afiado voltado para a parte rosa.

Mantendo o braço manipulador fora do caminho, levante cuidadosamente a peça óssea com um par de pinças angulares, inserindo a ponta na lateral do osso e puxando-a em um movimento. Em seguida, coloque um pequeno pedaço da espuma de gel absorvível embebida no cérebro descoberto para evitar que seque e absorva qualquer sangue que possa estar presente. Depois que a espuma de gel for colocada no cérebro, gire o braço do manipulador no lugar. Ajuste a lâmina para centralizar sobre a espuma de gel.

Em seguida, remova a espuma de gel e abaixe a lâmina até que a ponta toque a dura-máter sem perfurá-la. Marque as coordenadas dorsais-ventrais usando a escala vernier no braço vertical do quadro estereotáxico. Em seguida, usando o braço manipulador, abaixe lentamente a lâmina precisamente 3 milímetros no cérebro. Deixe a lâmina permanecer no lugar por 5 a 10 segundos.

Em seguida, mova lentamente o braço estereotáxico com a lâmina na direção rostral-caudal três vezes. Deixe a lâmina atingir os limites rostral e caudal da craniotomia antes de se mover para a extremidade oposta. Depois, levante lentamente o braço estereotáxico e remova a lâmina do cérebro.

Coloque outro pedaço de espuma de gel na superfície do cérebro imediatamente para absorver qualquer excesso de sangue ou fluido. Enquanto isso, remova o braço estereotáxico e descarte a lâmina do bisturi. Assim que o sangramento parar, remova a espuma de gel.

Feche a ferida suturando a pele com suturas não absorvíveis, como Ethilon ou Prolene, e remova as suturas 9 a 10 dias após a cirurgia. Em seguida, administre 0,5 a 1 mililitro de solução de Ringer com lactato por via subcutânea, para garantir a hidratação.