Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:31 min. • July 8th, 2025
No cérebro do peixe-zebra, os neurônios expressam orexina e receptores canabinóides que regulam o metabolismo.
No peixe-zebra obeso induzido por dieta, ou DIO, esses receptores cada vez mais co-localizam para formar heterômeros, alterando a sinalização a jusante e impactando a regulação metabólica.
Faça criossecções do tecido cerebral do peixe-zebra controle e DIO. Lave as seções com tampão para remover o meio de incorporação.
Trate com um tampão bloqueador de permeabilização para permeabilizar as membranas celulares e mascarar locais de ligação não específicos. Lave para remover o excesso de tampão.
Incubar com um coquetel de anticorpos primários direcionado aos receptores. Lave para remover anticorpos não ligados.
Incubar com diferentes anticorpos secundários marcados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários. Lave para remover anticorpos não ligados.
Adicione um corante fluorescente de ligação ao DNA para rotular o núcleo. Em seguida, aplique um meio de montagem e sele as seções com uma lamínula.
Usando um microscópio confocal, detecte a fluorescência do anticorpo. O aumento da co-localização dos anticorpos no peixe-zebra DIO em comparação com os controles indica maio
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