Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:59 min. • July 8th, 2025
Comece com um filhote de camundongo geneticamente modificado carregando o gene CCM2, que é essencial para a estabilidade dos vasos sanguíneos.
Este gene é flanqueado por dois sítios loxP. As células endoteliais do filhote também expressam a enzima Cre recombinase fundida a um receptor de estrogênio ou ER.
Injete 4-hidroxitamoxifeno ou 4-HT por via intragástrica no filhote.
O 4-HT se difunde através das células endoteliais e se liga à porção do receptor de estrogênio da proteína de fusão Cre-ER.
Essa ligação desencadeia uma mudança conformacional que ativa a Cre recombinase, que entra no núcleo das células endoteliais e se liga aos locais loxP.
Isso facilita o evento de recombinação entre os locais loxP, formando um loop e extirpando o segmento do gene CCM2.
A perda de CCM2 perturba a integridade das células endoteliais, comprometendo a estabilidade das paredes dos vasos sanguíneos.
Isso leva ao desenvolvimento de estruturas vasculares anormais inchadas conhecidas como malformações cavernosas cerebrais ou CCMs, que são frágeis e propensas a vazamentos.
Comece dissolvendo o 4-HT em etanol 100% até uma concentração de 10 miligramas por mililitro. Prepare alíquotas de 30 microlitros e armazene a 80 graus Celsius negativos. No dia do uso, dilua o 4-HT aliquotado em óleo de milho a 0,5 miligramas por mililitro. Em seguida, use uma seringa de insulina para injetar intragástrica 50 microlitros de 4-HT em filhotes neonatais P1 para induzir lesões experimentais de CCM.