Estudando o acúmulo de alfa-sinucleína em neurônios embrionários primários de dopamina de camundongo
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:13 min. • July 8th, 2025
Pegue culturas de micro-ilhas de neurônios dopaminérgicos embrionários primários de camundongo em uma placa de vários poços contendo meio.
Esses neurônios são pré-tratados com fibrilas pré-formadas (PFFs) - formas mal dobradas e agregadas da proteína alfa-sinucleína.
Os PFFs atuam como sementes, desencadeando mais desdobramento e oligomerização da alfa-sinucleína endógena, formando fibrilas de alfa-sinucleína fosforiladas. Essas fibrilas eventualmente formam corpos de Lewy.
Substitua o meio por um fixador para preservar a morfologia celular.
Lave as células com tampão.
Introduza um tampão contendo detergente para permeabilizar as membranas celulares.
Adicione uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Adicione anticorpos primários direcionados à alfa-sinucleína fosforilada e uma proteína de referência expressa de forma ubíqua em neurônios dopaminérgicos.
Lave para remover anticorpos não ligados.
Introduzir anticorpos secundários conjugados com fluoróforo direcionados aos respectivos anticorpos primários.
Lave novamente para remover os anticorpos não ligados.
Adicione um corante de ligação ao DNA para corar os núcleos.
Usando um scanner de placa de
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