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Pegue um camundongo anestesiado com o crânio exposto.
Identifique as suturas sagitais e coronais, que são as articulações do crânio, para localizar o local alvo da lesão.
Perfure o crânio e remova a aba óssea para expor a dura-máter, a camada protetora sobre o córtex cerebral.
Prenda o mouse em uma moldura estereotáxica com um dispositivo de impacto conectado.
Posicione a ponta do impactor sobre a área exposta para causar lesão cerebral traumática.
Abaixe a ponta para entrar em contato com a dura-máter, retraia-a para definir uma profundidade de impacto e aplique a lesão.
Retire o impactor e remova o mouse do quadro.
Controle o sangramento do local da lesão e, em seguida, feche o couro cabeludo usando adesivo cirúrgico.
Administre um analgésico por via subcutânea para aliviar a dor e permitir que o camundongo se recupere.
A lesão causa danos progressivos ao córtex e às regiões subjacentes do hipocampo e do tálamo, juntamente com o acúmulo de líquidos, prejudicando as funções cognitivas e a coordenação motora.
Para induzir uma lesão cerebral traumática cortical controlada, primeiro use um bisturi para fazer uma incisão de 1 centímetro ao longo da linha média do couro cabeludo para expor o crânio. Retraia o couro cabeludo do local da operação e identifique as suturas sagitais e coronais no crânio exposto.
Para realizar uma craniectomia, equipe uma micro broca com uma broca trefina de 5 milímetros, para ativar a broca na velocidade máxima e aplicar a broca perpendicular ao crânio, 2 milímetros à esquerda da sutura sagital e 2 milímetros rostral à sutura coronal com pressão suave e uniforme. Uma leve elasticidade será sentida quando a broca penetrar no crânio.
Use uma pinça e uma agulha hipodérmica de pequeno calibre para remover o retalho ósseo, expondo totalmente a dura-máter subjacente, e gire a ponta do impactor para o campo operatório. Prenda os ossos temporais bilaterais entre as barras auriculares em miniatura da estrutura estereotáxica e trave os incisivos dentro da pinça do incisivo para criar uma fixação estável de três pontos na cabeça do mouse. Abaixe a ponta até que ela entre em contato com a dura-máter exposta. O sensor de contato do instrumento emitirá um tom audível para alertar que o contato foi feito.
Retraia a ponta de impacto do ponto zero e abaixe a posição do impactor na estrutura estereotáxica para definir a profundidade de impacto desejada. Em seguida, ative o impactor no dispositivo de acionamento antes de girar o dispositivo de volta para fora do campo para permitir que o animal seja removido da estrutura.
Imediatamente após a lesão, aplique pressão direta de um aplicador com ponta de algodão estéril no crânio e na superfície cortical lesionada para controlar qualquer sangramento e use um aplicador novo para secar o crânio. Feche o couro cabeludo sobre a craniectomia de acordo com as técnicas padrão e administre analgesia pós-operatória. Em seguida, coloque o animal em decúbito lateral em uma gaiola limpa e pré-aquecida com monitoramento até a decúbito total e meça o peso corporal a cada três dias durante o experimento.