Obtenção de suspensões celulares de tecidos cerebrais isquêmicos de camundongos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:47 min. • July 8th, 2025
Pegue tecidos cerebrais isquêmicos de camundongos perfundidos contendo células cerebrais e células imunes infiltradas.
Pique os lenços em uma peneira e enxágue com tampão.
Centrifugar o filtrado e rejeitar o sobrenadante.
Ressuspenda o pellet em uma solução de enzima digestiva e transfira-o para um tubo de microcentrífuga.
Incube para que as enzimas digestivas quebrem a matriz extracelular, soltando as células.
Filtre a suspensão e enxágue com tampão contendo DNase para remover o DNA contaminante.
Em seguida, lave com tampão sem DNase.
Centrifugar o filtrado e rejeitar o sobrenadante.
Ressuspenda as células no meio gradiente de densidade. Em seguida, transfira o conteúdo para um novo tubo e misture. Centrifugue para separar os componentes por densidade.
Remova o sobrenadante contendo mielina e detritos.
Ressuspenda o pellet em tampão sem DNase. Transfira para um novo tubo e centrifugue novamente.
Rejeitar o sobrenadante para assegurar uma remoção suficiente do meio de gradiente de densidade.
Finalmente, ressuspenda as células no tampão para análise posterior.
Usando a extremidade do êmbolo de uma seringa de 5 mililitros, amasse os pedaços de tecido cerebral através de um filtro de
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos