JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 3:43 min • July 8th, 2025
Pegue uma seringa cheia de levodopa, um precursor da dopamina e um inibidor da conversão da dopamina.
Injete esta solução no tecido subcutâneo de um rato contido com doença de Parkinson, exibindo neurônios produtores de dopamina danificados.
No rato, o inibidor se liga às enzimas produtoras de dopamina e impede a conversão prematura da levodopa em dopamina.
A levodopa entra na corrente sanguínea, atravessa a barreira hematoencefálica por meio de canais de aminoácidos e entra nos neurônios produtores de dopamina não danificados.
As enzimas nesses neurônios convertem a levodopa em dopamina, um neurotransmissor excitatório, e a liberam na sinapse.
A dopamina se liga a seus receptores nos neurônios pós-sinápticos, desencadeando a transmissão do sinal.
Repita as injeções periodicamente para aumentar a produção de dopamina.
Com o tempo, o excesso de dopamina leva à superestimulação de seus receptores e à sinalização neuronal excessiva, o que eventualmente interrompe os movimentos do corpo do rato.
Coloque o rato em uma gaiola e observe seu comportamento. O rato exibe movimentos corporais involuntários e repetitivos, conhecidos como discinesias, induzidos pela levodopa.
Antes da injeção de L-DOPA, adicione o volume apropriado de solução salina estéril à mistura de L-DOPA e benserazida liofilizada e pré-pesada no frasco âmbar e agite bem por 10 segundos. Imediatamente após a preparação, encher o volume necessário da mistura de L-DOPA-benserazida para cada animal em seringas individuais, montadas com uma agulha de calibre 26, e rotular cada seringa com uma identificação individual do animal.
Depois de levar a primeira gaiola para a bancada de injeção, remova o rato de sua gaiola para colocá-lo na superfície de injeção. Use a mão não dominante para conter a cabeça e os ombros do rato com a palma da mão contra a superfície e esfregue a pele das costas que cobre as escápulas com o polegar e o indicador. Use a mão dominante para injetar o volume de L-DOPA no espaço subcutâneo entre os dedos, mantendo a agulha paralela ao corpo para evitar injeção intramuscular.
Após a injeção, mova o rato para dentro da gaiola. Em seguida, ajuste o cronômetro para um a dois minutos e repita o procedimento, injetando um rato a cada um a dois minutos até que todos os ratos sejam injetados. No dia da classificação, posicione um cronômetro próximo à gaiola para observar a discinesia induzida por levodopa, ou intensidade do comportamento LID, enquanto estima a frequência de qualquer comportamento durante o período de classificação.
Classifique a intensidade e a frequência dos movimentos de discinesia distônica e hipercinética, incluindo o início inicial do comportamento da LIP, o comportamento de pico e a fase de declínio no número desejado de pontos de tempo. Se estiver usando intervalos de classificação de um minuto, defina um cronômetro para um minuto para avaliar o primeiro rato e continue a classificação em todos os ratos em intervalos de um minuto.