Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:04 min. • July 8th, 2025
Comece com um slide contendo uma seção fina de um organoide cortical que contém células gliais e neurônios em vários estágios de envelhecimento.
Os neurônios envelhecidos, em estado de senescência com declínio da função celular, contêm altos níveis de beta-galactosidase.
A seção é pré-tratada com um fixador para estabilizar a estrutura celular e um agente permeabilizante para permeabilizar suas membranas.
Coloque a lâmina em um recipiente de coloração para lavar com um tampão para remover quaisquer vestígios de solução.
Manchar a lâmina com uma solução contendo um substrato para a enzima beta-galactosidase e incubar.
O substrato entra nas células, onde a beta-galactosidase cliva o substrato, produzindo um produto de cor azul que se acumula mais nos neurônios envelhecidos.
Lave repetidamente a seção.
Adicione um suporte antidesbotamento e deixe solidificar, garantindo a integridade da seção manchada.
Observe a lâmina ao microscópio; a área com um produto de cor azul intenso indica os neurônios envelhecidos dentro do organoide.
Após a crioseccionação dos organoides, remova o excesso de solução de montagem transferindo as lâminas para um recipiente de suporte deslizante com tampa e lave o tecido organoide seccionado três vezes com PBS por 10 minutos em temperatura ambiente. Em seguida, incube as lâminas durante a noite a 37 graus Celsius com uma solução de coloração de beta-galactosidase recém-fabricada. Lave os tecidos corados três vezes com PBS por 10 minutos cada em temperatura ambiente para remover a solução de beta-galactosidase.
Agora, monte os tecidos lavados com um suporte antidesbotamento de vidro e deixe a solução de montagem solidificar por 30 minutos em temperatura ambiente antes de visualizá-la ao microscópio.