Desencadeando e monitorando convulsões induzidas pelo calor em um modelo de camundongo transgênico

Pegue um camundongo adulto transgênico anestesiado carregando uma mutação genética que leva a canais de sódio disfuncionais nos interneurônios inibitórios.

Prenda uma sonda retal lubrificada para monitorar sua temperatura corporal.

Coloque o mouse em uma gaiola de recuperação até que a temperatura corporal se estabilize.

Em seguida, transfira o animal para uma câmara de calor pré-aquecida e comece a gravar o vídeo.

Aumente a temperatura da câmara em intervalos regulares enquanto monitora o aumento gradual da temperatura corporal do camundongo.

À medida que a temperatura corporal aumenta, a disfunção nos canais de sódio piora, reduzindo a liberação de neurotransmissores inibitórios.

Essa liberação reduzida interrompe o equilíbrio entre a excitação e a inibição neuronal, resultando em hiperexcitabilidade neuronal e convulsões.

Registre a temperatura corporal durante a convulsão e observe suas características comportamentais.

Agora, coloque o mouse em uma almofada de resfriamento até que a temperatura corporal se normalize.

Por fim, remova a sonda retal e deixe o mouse se recuperar.

Comece ligando a câmara de calor do mouse, com o botão liga / desliga e, em seguida, pressione o botão de aquecimento. Usando o teclado do controlador de temperatura digital, ajuste a temperatura da câmara de calor para 50 graus Celsius. Forre o piso da câmara de calor com cama de espiga.

Monte uma câmera de gravação de vídeo na frente da câmara de calor. Forre uma placa de Petri de 140 milímetros de diâmetro com camadas grossas de papel de seda e coloque-a no gelo para servir como uma almofada de resfriamento. Para o ensaio de triagem, certifique-se de que o peso corporal do camundongo seja de 15 gramas ou mais. Antes de iniciar o procedimento, confirme se o mouse está completamente anestesiado com uma pitada no dedo do pé.

Cubra a ponta de metal da sonda de temperatura retal com um lubrificante e insira-a suavemente no mouse. Prenda a sonda retal na cauda do mouse com fita adesiva. Coloque o mouse em uma nova gaiola de recuperação forrada com cama de espiga. Inicie um cronômetro e observe o mouse por 5 minutos enquanto monitora a temperatura corporal central até que o mouse se recupere completamente da anestesia e a temperatura se estabilize em 35 a 36 graus Celsius.

Ao final de 5 minutos, observe a temperatura corporal do camundongo como a temperatura corporal inicial em 0 minuto. Transfira o mouse rapidamente para o chão da câmara de calor pré-aquecida do mouse para iniciar o teste do experimento. Depois que o mouse for colocado na câmara do mouse pré-aquecido, inicie a câmera e o cronômetro.

Aumente a temperatura da câmara de calor em intervalos regulares, de modo que a temperatura corporal do camundongo aumente a uma taxa de 0,25 a 0,5 graus Celsius por minuto. Comece a registrar a temperatura corporal do camundongo em intervalos de 1 minuto durante o experimento. Aos 9.5 minutos, defina a temperatura da câmara de calor para 55 graus Celsius, para estabilizar a temperatura da câmara de calor em 55 graus Celsius no 10º minuto.

Da mesma forma, atinja uma temperatura estável da câmara de calor a 60 graus Celsius no 20º minuto. Cada teste de triagem de convulsões dura 30 minutos. Se o camundongo tiver uma convulsão, registre a temperatura corporal do camundongo durante a convulsão como uma temperatura limite de convulsão. Observe as características do comportamento de convulsão exibidas pelo mouse.

Em seguida, pegue rapidamente o mouse da câmara e coloque-o na almofada de resfriamento. Quando a temperatura corporal do camundongo cair para 36 a 37 graus Celsius, transfira o camundongo para uma gaiola de recuperação. Para remover a sonda retal do mouse, corte cuidadosamente a fita entre a cauda do mouse e o fio da sonda retal.