Coloração imuno-histoquímica da proteína S-100 em seções de biópsia por sucção retal humana

0 vistas3:02 min • July 8th, 2025

Faça seções fixas de biópsia por sucção retal humana com antígenos proteicos expostos e peroxidases endógenas inativadas.

Adicione uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.

Substitua a solução de bloqueio por anticorpos primários que se ligam à proteína alvo das células gliais, S-100, um marcador da doença de Hirschsprung.

Remova os anticorpos não ligados e incube com polímeros de peroxidase para amplificar o sinal.

Lave para remover o excesso de polímero. Adicione anticorpos secundários que se ligam a polímeros enzimáticos e anticorpos primários.

Remova os anticorpos não ligados e adicione um substrato cromogênico.

As peroxidases reagem com o substrato, formando um precipitado colorido.

Enxágue para remover o excesso de precipitado.

Adicione um corante para manchar os núcleos.

Lave com uma solução de ácido e etanol para remover o excesso de corante.

Em seguida, desidrate as seções usando concentrações crescentes de etanol seguido de xileno.

Finalmente, monte e observe ao microscópio para visualizar a coloração indicando a presença da proteína alvo.

Descarte o excesso de albumina sérica bovina e marque as células com 50 microlitros do anticorpo primário de interesse a 4 graus Celsius durante a noite. Na manhã seguinte, enxágue as lâminas com três lavagens de três minutos em PBS e adicione 50 microlitros de intensificador de polímero a cada lâmina. Após 20 minutos a 37 graus Celsius, lave as lâminas três vezes em PBS e adicione 50 microlitros de anticorpo secundário B a cada seção de tecido.

Após 30 minutos a 37 graus Celsius, enxágue as seções com três lavagens de cinco minutos em PBS e adicione uma gota de solução de trabalho DAB recém-preparada a cada lâmina. Quando o nível apropriado de coloração marrom for detectado por microscopia de luz, enxágue as lâminas em PBS por cinco minutos e contra-core os núcleos com uma gota de hematoxilina por um minuto.

Remova o excesso de mancha sob um fio de água por aproximadamente 30 a 40 segundos, seguido por uma lavagem de 25 a 30 segundos em PBS fresco. Diferencie os tecidos em etanol de ácido clorídrico a 1% por 10 segundos, seguido por uma lavagem de PBS de um minuto.

Desidrate as lâminas com imersões de cinco minutos na ordem inversa da hidratação e exponha as lâminas a duas trocas de xileno de cinco minutos. Em seguida, monte a lamínula usando uma montagem ultralimpa e deixe as lâminas secarem antes de serem visualizadas em um microscópio óptico.

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Última atualização: 29 agosto 2026