Coloração imuno-histoquímica da proteína S-100 em seções de biópsia por sucção retal humana

Faça seções fixas de biópsia por sucção retal humana com antígenos proteicos expostos e peroxidases endógenas inativadas.

Adicione uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.

Substitua a solução de bloqueio por anticorpos primários que se ligam à proteína alvo das células gliais, S-100, um marcador da doença de Hirschsprung.

Remova os anticorpos não ligados e incube com polímeros de peroxidase para amplificar o sinal.

Lave para remover o excesso de polímero. Adicione anticorpos secundários que se ligam a polímeros enzimáticos e anticorpos primários.

Remova os anticorpos não ligados e adicione um substrato cromogênico.

As peroxidases reagem com o substrato, formando um precipitado colorido.

Enxágue para remover o excesso de precipitado.

Adicione um corante para manchar os núcleos.

Lave com uma solução de ácido e etanol para remover o excesso de corante.

Em seguida, desidrate as seções usando concentrações crescentes de etanol seguido de xileno.

Finalmente, monte e observe ao microscópio para visualizar a coloração indicando a presença da proteína alvo.

Descarte o excesso de albumina sérica bovina e marque as células com 50 microlitros do anticorpo pr