Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:19 min. • July 8th, 2025
Comece com uma cultura aderente de neurônios humanos maduros em uma placa revestida com matriz.
Adicione vetores lentivirais que codificam uma proteína tau humana mutante fundida a um repórter de proteína fluorescente amarela (YFP).
O lentivírus se liga a receptores específicos da superfície celular neuronal, permitindo a fusão da membrana viral-hospedeiro e a liberação de RNA viral e enzimas.
O RNA viral é transcrito reversamente em DNA.
A integrase viral transporta o DNA para o núcleo, facilitando a integração no genoma do hospedeiro e levando à produção da proteína tau mutante marcada com YFP.
Com o tempo, a tau mutante forma agregados citoplasmáticos nas células transduzidas.
Lave as células com meios frescos para remover partículas virais não internalizadas.
Continue a incubação com mudanças regulares de mídia para manter a viabilidade neuronal e promover a agregação de proteínas.
Visualize os neurônios sob um microscópio.
Os neurônios transduzidos com sucesso exibem agregados citoplasmáticos da proteína tau mutante fluorescente marcada com YFP.
Para transduzir neurônios com lentivírus, use uma contagem de títulos de 340.000 unidades transdutíveis por célula. Diluir as unidade
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