Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:35 min. • July 8th, 2025
Pegue um rato anestesiado com o crânio exposto e uma sonda implantada para medir a pressão intracraniana.
Usando um ponto de referência no crânio, marque o local alvo e faça um furo.
Remova os fragmentos ósseos e preencha o buraco com cera óssea.
Faça outro furo. Localize um vaso sanguíneo e prenda uma sonda para medir o fluxo sanguíneo cerebral.
Pegue uma agulha e insira-a no cérebro até que o crânio seja sentido.
Retraia ligeiramente para garantir sua colocação na frente do quiasma óptico, onde os principais vasos sanguíneos estão localizados.
Encha a câmara da agulha com sangue fresco retirado da cauda do rato e conecte a seringa contendo sangue.
Injete o sangue no espaço subaracnóideo cheio de líquido entre as membranas cerebrais externa e interna, o que aumenta a pressão intracraniana, causando constrição dos vasos sanguíneos.
Isso leva a uma diminuição do fluxo sanguíneo cerebral, estabelecendo um modelo de hemorragia subaracnoide.
Para colocar a sonda Doppler a laser, faça uma incisão de 15 milímetros caudalmente na linha média, começando logo anterior aos olhos. Após remover o tecido conjuntivo e os músculos com fórceps, use a ponta de um cotonete estéril como regime para identificar o bregma e as suturas coronais.
Depois de colocar o afastador armado, coloque uma agulha espinhal de calibre 25 na estrutura estereotáxica exatamente no bregma e anote a posição. Em seguida, remova a agulha do bregma. Mova a armação anteriormente em 6,5 milímetros e, em seguida, recoloque a agulha na linha média para marcar o lado da perfuração.
Perfure até que a dura-máter seja identificada abaixo do osso. Usando uma pinça reta, remova suavemente os fragmentos ósseos e preencha a cavidade com cera óssea. Em seguida, 3 a 4 milímetros laterais à direita do bregma e logo anterior à sutura coronal para o laser Doppler, faça outro furo tomando cuidado para não penetrar na dura-máter.
Procure os vasos onde o laser Doppler pode medir o fluxo sanguíneo. Coloque o laser Doppler e verifique os valores. É necessário um valor mínimo de 100 unidades de fluxo. Se os valores permanecerem aceitáveis após a remoção do microscópio, adicione 1 gota de cola para fixar a sonda. Verifique novamente se o valor está acima de 80 unidades de fluxo.
Para induzir hemorragia subaracnoide, insira a agulha suavemente através do crânio na linha média entre os hemisférios até sentir resistência devido à base do crânio. Retraia a agulha em 1 milímetro para garantir o posicionamento correto logo antes do quiasma óptico. Para garantir o resultado mais homogêneo ao injetar o sangue, gire a agulha 90 graus no sentido horário, de modo que a ponta da agulha aponte para a direita. Em seguida, remova o estilete.
Após um equilíbrio de 15 minutos, ajuste o nível de anestesia para obter uma pressão arterial média na faixa de 80 a 100 milímetros de mercúrio. Em seguida, faça uma análise de gases sanguíneos para confirmar se o pH, a pressão parcial de dióxido de carbono e a pressão parcial de oxigênio estão dentro dos parâmetros fisiológicos.
Em seguida, usando uma seringa de 1 mililitro com uma agulha romba de calibre 23, retire 500 microlitros de sangue do cateter de cauda. Para evitar a injeção de ar, preencha o espaço morto da câmara da agulha espinhal com sangue. Depois de ajustar o volume de sangue na seringa para 300 microlitros, conecte a seringa à agulha espinhal. Em seguida, segurando firmemente a seringa, injete o sangue manualmente para superar a pressão arterial média. Observe um aumento acentuado na pressão intracerebral e uma queda acentuada simultânea no fluxo sanguíneo cerebral.