Infecção pelo vírus Zika de células-tronco neurais fetais

Pegue uma suspensão do vírus Zika, um vírus patogênico, tendo a multiplicidade desejada de infecção, a proporção de partículas virais para células.

Misture a suspensão do vírus com células-tronco neurais do cérebro fetal humano.

Incube a mistura, permitindo que o vírus se ligue aos receptores nas células, facilitando a endocitose viral.

Em seguida, centrifugue a mistura e descarte o sobrenadante contendo partículas virais não internalizadas.

Ressuspenda as células infectadas pelo vírus no meio e semeie-as em uma placa de vários poços revestida com proteína da matriz extracelular, permitindo a adesão celular.

Incube a placa.

O vírus Zika internalizado utiliza a maquinaria da célula hospedeira para produzir novas partículas virais.

A replicação viral altera significativamente a morfologia celular, causando danos celulares e facilitando a disseminação da infecção para as células vizinhas.

As células infectadas pelo vírus Zika podem ser usadas para análises posteriores.

Ressuspenda o pellet no estoque de ZIKV em uma multiplicidade de infecção, ou MOI, entre 1 e 10. O volume da solução de ZIKV não deve exceder 0,5 mililitros. Incube as amostras a 37 graus Celsius por uma hora. Em seguida, inverter o tubo duas a três vezes e centrifugar a mistura a 216 vezes g à temperatura ambiente durante cinco minutos para obter um sedimento celular.

Remover o sobrenadante por aspiração. Em seguida, ressuspenda as células com DPBS para enxaguá-las. Em seguida, centrifugar a mistura a 216 vezes g durante cinco minutos e remover o sobrenadante por aspiração. Ressuspenda as células com 12 mililitros do meio apropriado. Em seguida, carregue 500 microlitros das células infectadas em uma placa de 24 poços.