Tratamento de fatias coronais de rato com um peptídeo neurotóxico

Pegue uma seção coronal do cérebro de rato e corte-a ao longo da linha média para obter hemisfatias, garantindo que ambas se originem da mesma região anatômica para experimentos de controle e teste.

Transfira as hemifatias para aCSF oxigenado para recuperação.

Em seguida, coloque-os em frascos com aCSF para o controle e aCSF com um peptídeo neurotóxico para o teste.

Sele os frascos com agulhas oxigenantes para fornecer oxigênio ao tecido e incubar.

No frasco de teste, o peptídeo neurotóxico se liga ao seu receptor neuronal, interrompendo a sinalização neuronal normal.

Essa sinalização interrompida leva ao acúmulo de proteínas neurotóxicas e altera as proteínas associadas aos microtúbulos, promovendo a neurodegeneração.

Após a incubação, transferir as hemifatias para tubos contendo tampão de lise refrigerado.

Homogeneizar o tecido para liberar o conteúdo celular, enquanto os inibidores no tampão evitam a degradação da proteína.

Centrifugar e recolher o sobrenadante que contém proteínas solúveis e armazená-lo para análise posterior.

Divida cuidadosamente cada seção com uma pequena tesoura ao longo da linha média para obter duas hemifatias especulares. Use cada par de hemi-fatias para