Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:39 min. • July 8th, 2025
Pegue uma microplaca com inserções transwell revestidas com proteínas ECM para promover a adesão celular.
Adicione células endoteliais microvasculares do cérebro humano, ou HBMECs, nas inserções e um meio de crescimento nos compartimentos inferiores.
Incubar, permitindo que as células adiram e cresçam em uma monocamada. Essas células expressam junções apertadas, imitando o endotélio da barreira hematoencefálica que limita a passagem de células e moléculas.
Remova o meio. Adicione células mononucleares do sangue periférico, ou PBMCs, às inserções e um meio de cultura aos compartimentos inferiores.
Incubar, permitindo que os linfócitos PBMC interajam com as células endoteliais e depois passem entre elas, um processo chamado transmigração.
Enxágue o fundo da inserção, coletando as células transmigradas aderidas nos compartimentos inferiores.
Introduzir microesferas fluorescentes como referência para quantificação celular.
Transfira a suspensão para um tubo, centrifugue, descarte o sobrenadante e ressuspenda em um coquetel de anticorpos conjugado com fluoróforo para marcar os linfócitos.
Os linfócitos transmigrados estão prontos para quantificação por citometria de fluxo.
Para preparar
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