JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 3:15 min • July 8th, 2025
Pegue um rato submetido à oclusão da artéria cerebral média, restringindo o fluxo sanguíneo para o hemisfério direito do cérebro.
O suprimento sanguíneo reduzido priva as células cerebrais de oxigênio, interrompe a regulação da água, causa inchaço ou edema celular e leva à ruptura da barreira hematoencefálica.
As células danificadas eventualmente morrem, formando uma zona de infarto.
Injete um corante azul na veia da cauda do rato para detectar a interrupção da BHE.
Colha o cérebro, corte-o com lâminas de barbear e incube as fatias em uma solução de corante redox.
Nas células vivas, o corante reage com as desidrogenases mitocondriais e sofre redução, tornando o tecido viável vermelho.
As áreas infartadas, sem atividade de desidrogenase, permanecem brancas.
Digitalize as fatias para obter imagens de alta resolução.
Usando um software de análise de imagem, aplique um filtro azul para eliminar a cor do corante azul, convertendo as imagens em tons de cinza.
Aplique o limiar para distinguir o tecido preto saudável do tecido branco infartado.
Calcule a zona de infarto e o edema cerebral como uma porcentagem do hemisfério contralateral não afetado.
Para começar, remova o cérebro do rato e corte seções horizontais de 2 milímetros de espessura com uma lâmina de barbear de borda única sem revestimento de aço inoxidável de 0,009 polegadas. Coloque as seções em 0,005% TTC e incube-as por 30 minutos a 37 graus Celsius. Em seguida, coloque o tecido cerebral nas lâminas do microscópio e realize a varredura óptica das seis fatias cerebrais com uma resolução de 1.600 por 1.600 DPI. Use um editor de fotos para adicionar um filtro azul às imagens.
Depois de abrir o software, vá para Imagem, Ajustes e Mixer de Canais. Selecione Azul como canal de saída e marque Monocromático. Em seguida, clique em OK. Salve a imagem no formato de arquivo JPEG. Use a ferramenta de seleção de polígonos no ImageJ versão 1.37 para selecionar cada hemisfério de cada uma das seis fatias cerebrais e salvá-lo como um arquivo de imagem separado.
Para calcular o volume do infarto e o edema cerebral, use uma macro para converter os pixels da imagem em branco ou preto com base em um limite. Em seguida, feche todos os arquivos e use uma segunda macro para comparar o número de pixels brancos e pretos para determinar o volume do infarto e o edema cerebral. Copie os dados brutos para uma planilha. Ao calcular o volume do infarto, corrija o inchaço do tecido usando as proporções dos hemisférios cerebrais ipsilaterais e contralaterais. Expresse as áreas de edema cerebral como uma porcentagem das áreas padrão do hemisfério contralateral não afetado.