Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:58 min. • July 8th, 2025
Pegue uma seção fixa do cérebro de camundongo contendo o núcleo basal de Meynert, rico em fibras nervosas que expressam a enzima colina acetiltransferase.
A seção é pré-tratada para desativar a peroxidase endógena.
Adicione um detergente para permeabilizar as membranas celulares, seguido por uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Substitua a solução por anticorpos primários que se ligam à colina acetiltransferase.
Lave com tampão para remover anticorpos não ligados. Incube com anticorpos secundários marcados com biotina, que se ligam aos anticorpos primários.
Remova os anticorpos não ligados e adicione complexos avidina-biotina-peroxidase, que se ligam aos anticorpos secundários.
Lave para remover o excesso de complexos.
Adicione um substrato cromogênico que reage com a peroxidase, formando um precipitado colorido.
Enxágüe com água destilada para remover o excesso de precipitado.
Transfira a seção para uma lâmina gelatinizada.
Em seguida, desidrate a seção usando concentrações crescentes de etanol, seguidas de xileno.
Monte a seção e observe ao microscópio para visualizar as fibras nervosas coradas.
Para marcação imuno-histoquímica das seções d
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