Medindo a captação de dopamina em sinaptossomos cerebrais de camundongos usando dopamina radiomarcada

Colha sinaptossomos, estruturas ligadas à membrana derivadas dos terminais pré-sinápticos intactos das sinapses neuronais que contêm transportadores de dopamina (DAT), de um cérebro de camundongo.

Encha os tubos de ensaio com tampão contendo ligantes e os tubos de referência com tampão contendo ligantes e um inibidor de DAT.

Adicione os sinaptossomos.

Os ligantes inibem enzimas degradadoras de dopamina e outros transportadores, impedindo a degradação da dopamina e a captação inespecífica.

Introduza dopamina não marcada e radiomarcada.

Na condição de teste, o DAT sinaptossômico absorve a dopamina.

Na condição de referência, o inibidor impede a captação de dopamina mediada por DAT, permitindo apenas a captação de fundo.

Adicione as amostras a filtros de microfibra que retêm os sinaptossomos.

Lave para remover a dopamina não ligada.

Transfira os filtros para tubos de cintilação.

Adicionar líquido de cintilação contendo um composto radiossensível.

Coloque os tubos em um contador de cintilação.

As emissões radioativas da dopamina excitam o composto a emitir luz, que é medida pelo contador.

Subtraia a referência dos dados do teste para medir a captação de dopamina sinaptossômica.

Nesta e