Marcação de interneurônios preenchidos com biocitina em fatias de hipocampo de rato para visualização
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:06 min. • July 8th, 2025
Pegue fatias fixas e permeabilizadas de hipocampo de rato contendo interneurônios cheios de biocitina com peroxidases endógenas inativadas.
Adicione complexos avidina-biotina (ABC) contendo peroxidase de rábano (HRP) e incube, permitindo que a avidina se ligue à biocitina.
Lave o ABC não encadernado.
Adicione uma mistura de substrato cromogênico e intensificador de metal e incube.
Introduza peróxido de hidrogênio para ativar o HRP, que oxida o substrato para formar um precipitado escuro, enquanto o intensificador melhora o contraste.
Transfira as fatias para papel de filtro e remova o excesso de buffer. Trate com tetróxido de ósmio para aumentar o contraste.
Coloque as fatias em uma lâmina e monte. Desidrate-os usando concentrações crescentes de etanol.
Lave as fatias em etanol absoluto e óxido de propileno.
Adicione resina para infiltrar os tecidos.
Coloque as fatias em uma prancheta e aqueça para polimerizar a resina. Transfira as fatias para uma lâmina, coloque uma lamínula e solidifique a resina.
Usando microscopia de luz, visualize os interneurônios cheios de biocitina com coloração escura.
Coloque as secções num frasco de vidro limpo contendo PBS. Realize a reação de AVIDINA
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos