Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:24 min. • July 8th, 2025
Comece com uma fatia de cérebro cerebelar de camundongo contendo fibras paralelas, fibras de escalada e células de Purkinje, essenciais para o controle motor.
A fatia é submersa em um líquido cefalorraquidiano artificial, com um eletrodo de registro conectado a uma célula de Purkinje e eletrodos estimulantes próximos às fibras paralelas e trepadeiras.
Aplique estímulos elétricos nas fibras paralelas, provocando a liberação de glutamato, um neurotransmissor excitatório próximo à célula de Purkinje.
Os neurotransmissores se ligam aos receptores de glutamato, levando ao influxo de íons que ativa as células de Purkinje e gera um sinal elétrico.
Ajuste a intensidade do estímulo para uma resposta ideal das células de Purkinje.
Em seguida, forneça estímulos repetitivos para as fibras trepadeiras e paralelas.
Os estímulos da fibra trepadeira ativam canais de cálcio dependentes de voltagem na célula de Purkinje, causando um influxo significativo de cálcio.
Isso desencadeia a internalização dos receptores de glutamato, reduzindo a sensibilidade da célula ao glutamato.
Isso induz depressão de longo prazo, caracterizada por uma resposta diminuída à estimulação paralela de fibras.
Para indução de depressão de longo prazo, estimule a camada molecular com um pulso de 0,1 milissegundo e aplique um estímulo de pulso duplo para identificar as correntes pós-sinápticas excitatórias de fibras paralelas. Deve ser observada uma facilitação de pulso pareada e um aumento gradual da amplitude em relação ao aumento da intensidade da estimulação. Para registrar a resposta do teste, aplique um único pulso de 0,1 hertz e ajuste a intensidade do estímulo para que a amplitude evocada seja de cerca de 200 picoamperes.
Estimule as fibras trepadeiras na parte inferior da camada de células de Purkinje e, para identificar as correntes pós-sinápticas excitatórias da fibra paralela provocadas pela ativação da fibra trepadeira, aplique um estímulo de pulso duplo. Uma depressão de pulso pareada deve ser observada de maneira tudo ou nada, em correlação com o aumento da intensidade da estimulação.