Coloração por imunofluorescência de cérebros de Drosophila para a imagem de célula única de células gliais

Comece com cérebros de moscas transgênicas Drosophila, contendo diferentes tipos de células gliais que abrigam um sistema de recombinase específico da célula.

Ele impulsiona a expressão de uma proteína de superfície celular fundida a diferentes epítopos antigênicos no mesmo tipo de células.

Trate o tecido com um fixador para reticular proteínas e preservar a arquitetura do tecido.

Lave para remover o excesso de fixador.

Adicione proteínas bloqueadoras para mascarar locais de ligação não específicos para reduzir a coloração de fundo.

Incube o tecido com um coquetel de anticorpos primários que se liga aos diferentes epítopos expressos nas células gliais.

Lave para remover anticorpos primários não ligados.

Incubar com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.

Lave para remover anticorpos secundários não ligados.

Monte o cérebro dentro de um espaçador de imagem e coloque uma lamínula. O espaçador cria uma câmara para o tecido, preservando sua estrutura tridimensional.

Diferentes células do mesmo tipo glial marcadas com diferentes anticorpos conjugados com fluoróforo permitem uma compreensão das interações célula-célula.

Transfira os cérebro