Uma técnica de ablação guiada estereotáticamente para remoção do córtex auditivo em ratos

Pegue um rato anestesiado preso em uma estrutura estereotáxica.

Raspe e desinfete o couro cabeludo e, em seguida, faça uma incisão para expor o crânio.

Identifique as referências anatômicas do bregma, do lambda e da linha interaural para localizar o córtex auditivo, a região do cérebro que processa os sinais sonoros.

Incisar e retrair o músculo temporal, revelando o osso temporal.

Posicione uma agulha no ponto médio da linha interaural. Usando este ponto de referência, determine as coordenadas acima do córtex auditivo.

Perfure a região marcada e remova o osso para expor o cérebro.

Corte as meninges, as camadas que cobrem o cérebro.

Realize a ablação aspirando as camadas corticais, preservando a substância branca. A remoção do córtex auditivo interrompe a capacidade de processamento do sinal sonoro.

Substitua o osso excisado, aplique gaze para controlar o sangramento e suture a pele.

Aplique pomada antibiótica para prevenir infecções e administre analgésicos subcutâneos para aliviar a dor.

Permita que o rato se recupere para avaliar o impacto da ablação.

Para iniciar este procedimento, coloque o rato anestesiado em uma almofada de aquecimento para manter a temperatura corporal. Em seguida, estabilize a cabeça do animal em uma estrutura estereotáxica usando duas barras auriculares e uma barra de mordida. Raspe o couro cabeludo e desinfete a área cirúrgica com iodopovidona.

Usando um bisturi, faça uma incisão ao longo da linha média para expor o crânio e retraia o periósteo que cobre a superfície do crânio. Depois disso, use uma ponta de algodão estéril para remover suavemente qualquer sangue que cubra a superfície do crânio, a fim de visualizar bregma, lambda e a linha interaural. Faça uma incisão no músculo temporal próximo à sua inserção dorsal no crânio com um bisturi. Em seguida, puxe o músculo para fora usando uma agulha e material de sutura e fixe o material de sutura na estrutura estereotáxica para expor o osso temporal.

Abaixe lentamente uma agulha reta estéril até que esteja logo acima da superfície do crânio, de modo que a ponta da agulha fique em zero interaural. Defina este ponto como zero. Depois disso, mire no AC usando quatro pontos. Em seguida, abaixe a agulha logo acima do osso temporal para visualizar cada um desses quatro pontos. Marque os pontos com um marcador no osso temporal e conecte-os para desenhar um retângulo. O retângulo servirá como guia para abrir uma janela no osso.

Neste procedimento, abra a janela usando uma furadeira elétrica e uma broca pequena. Perfure o perímetro do retângulo a 8.000 RPM até que o osso ceda. Resfrie a superfície de perfuração enxaguando-a com solução salina estéril fria para evitar danos às estruturas subcorticais. Quando o osso ceder, tome cuidado para não perfurar o cérebro.

Quando as bordas estiverem soltas, puxe o osso de cobertura com uma pinça fina e guarde-o em solução salina estéril fria. Usando um microscópio cirúrgico, corte suavemente as meninges com uma faca microcirúrgica e remova-as usando duas pinças de ponta fina. Se ocorrer sangramento, lave o local da cirurgia com solução salina estéril fria.

Em seguida, aspire suavemente o AC usando um dispositivo de sucção cirúrgica acoplado a uma agulha estéril de ponta romba de calibre 20. Aspire apenas as seis camadas corticais e não a substância branca subjacente. Este ponto é crítico e precisa ser realizado com muito cuidado. Quando a aspiração estiver concluída, cubra o local da cirurgia com o osso extraído e aplique uma gaze hemostática absorvível.

Deixe o músculo temporal recuperar sua posição original e, em seguida, suture a pele usando clipes de ferida. Depois disso, aplique pomada antibiótica na ferida. Posteriormente, injetar buprenorfina por via subcutânea no dorso do rato como analgésico, uma hora e oito horas após o término da cirurgia. Mantenha o animal na almofada de aquecimento até que ele acorde e devolva-o à gaiola para recuperação.