Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:08 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa contendo neurônios motores mielinizados cultivados, células nervosas que controlam os músculos e miotubos, células musculares multinucleadas.
O neurônio motor está conectado ao miotubo por meio de uma junção neuromuscular ou NMJ, um local para transmissão de sinal.
Adicione cloreto de cálcio ao poço.
Observe sob um microscópio invertido para obter imagens ao vivo e grave um filme.
Os íons de cálcio entram no neurônio motor e desencadeiam a liberação de acetilcolina, ou ACh, um neurotransmissor excitatório.
Esses neurotransmissores se ligam aos receptores ACh nos miotubos, permitindo a entrada de íons de sódio e desencadeando a contração dos miotubos.
Grave o filme. O software então gera um gráfico de movimento de tempo codificado por cores para contrações do miotubo, onde a cor vermelha indica a velocidade mais rápida e o azul representa a velocidade mais lenta.
Em seguida, introduza um bloqueador neuromuscular que se liga aos receptores ACh. Isso evita o influxo de sódio e restringe as contrações do miotubo.
Grave novamente o filme. Uma diminuição na cor vermelha indica uma redução nas contrações do miotubo.
Para desencadear as contrações do miotubo, adicione 25 milimolares de cloreto de cálcio a cada poço de células de junção neuromuscular diferenciadas. E dentro de um a dois minutos de tratamento, coloque a placa no palco de um microscópio invertido. Usando microscopia de células vivas, grave um filme da contração do miotubo por 20 segundos. No final da gravação, adicione 300 nanogramas por mililitro de curare ao meio de cultura e grave o filme por mais 20 segundos, antes de abrir o arquivo de filme em um programa de software de análise vetorial de movimento apropriado para análise.