Avaliação da captação de glicose nos neurônios motores de larvas de Drosophila com metabolismo de glicose regulado positivamente

Coloque as larvas de controle e mutantes de Drosophila em pratos separados contendo um tampão livre de glicose.

Disseque as larvas para remover órgãos internos, expondo o sistema nervoso central ou o SNC.

O SNC inclui um cordão nervoso ventral que abriga neurônios motores. Nas larvas mutantes, esses neurônios exibem metabolismo da glicose regulado positivamente.

Os neurônios motores em ambos os grupos expressam sensores intracelulares de glicose contendo fluoróforos doadores e aceptores.

Posicione as larvas sob um microscópio confocal. Após a excitação, o fluoróforo do doador emite fluorescência.

Localize os neurônios motores usando esta fluorescência.

Substitua o tampão por uma solução suplementada com glicose.

A glicose entra nos neurônios, ligando-se aos sensores e desencadeando uma mudança conformacional que aproxima os dois fluoróforos.

Após a excitação, o aceptor absorve a energia emitida pelo doador, denominada transferência de energia de ressonância de fluorescência ou FRET, e emite fluorescência.

O sinal FRET se correlaciona com a captação de glicose. Uma maior intensidade de sinal aceptor nas larvas mutantes em comparação com o controle indica metabolismo da glicose regul