Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:46 min. • July 8th, 2025
Pegue uma seção fixa de tecido cerebral de camundongo contendo uma população esparsa de astrócitos expressando uma proteína fluorescente.
Trate a seção flutuante com um tampão contendo detergente para permeabilizar as células.
Incube a seção em um tampão de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Trate a seção com anticorpos primários e incube para permitir que os anticorpos se liguem às proteínas fluorescentes nos astrócitos.
Lave qualquer excesso de anticorpos primários usando tampão.
Em seguida, incube a seção com anticorpos secundários marcados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.
Lave os anticorpos secundários não ligados com um tampão.
Transfira a seção para uma mistura de água deionizada tampão para remover resíduos de detergente.
Coloque a seção em uma lâmina contendo água deionizada com tampão. Remova o excesso de líquido e adicione o meio de montagem. Em seguida, posicione uma lamínula e prenda-a.
Finalmente, use microscopia confocal para visualizar os astrócitos que expressam proteínas fluorescentes marcados dentro da seção.
Para começar, prepare uma nova solução de TBST adicionando 1 mililitro de Triton X a 10% a um tubo de 50 mili
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