Microdissecção por captura a laser para isolar células de Purkinje de um tecido humano post-mortem do cerebelo

Pegue um tecido cerebelar humano post-mortem contendo as camadas de células de Purkinje, grânulos e células moleculares.

Coloque-o em um suporte de amostra de criostato contendo mídia de incorporação parcialmente congelada.

Deixe a mídia congelar completamente, prendendo o tecido.

Transfira este conjunto para o braço de corte do criostato e permita que o tecido se acostume à temperatura do criostato.

Aproxime o tecido da lâmina e corte-o para expor as camadas do córtex.

Coloque uma placa estabilizadora acima da lâmina e obtenha seções cerebelares.

Transfira essas seções para uma lâmina de membrana.

Incubar em concentrações crescentes de etanol para fixação e desidratação tecidual.

Em seguida, incube em xileno.

Seque a lâmina e coloque-a em um microscópio de captura a laser UV stage.

Posicione a tampa de coleta sobre o tecido cerebelar.

Microscopicamente, concentre-se nas células de Purkinje.

Usando o laser, capture e colete as células de Purkinje para análise posterior.

Primeiro, corte um pequeno pedaço de tecido para seccionar, certificando-se de que a seção tenha aproximadamente 95% do córtex cerebelar. Retorne o tecido restante para gelo seco ou para um freezer a 80 graus Celsiu