Gerando um modelo de cultura de órgãos para simular a doença do disco intervertebral em estágio inicial

Pegue um disco intervertebral (IVD), uma estrutura semelhante a uma almofada localizada entre as vértebras, de uma cauda bovina.

Posicione-o verticalmente e injete TNF-α recombinante, uma citocina pró-inflamatória, no núcleo pulposo (NP), o núcleo gelatinoso.

Retire a seringa até a metade e puxe o êmbolo para criar um vácuo, evitando o refluxo α TNF. Em seguida, remova a seringa.

Coloque o IVD em uma câmara de biorreator contendo meio e aplique uma carga de pressão intensa diariamente.

O TNF-α se liga a seus receptores nas células NP, desencadeando uma cascata de sinalização.

Isso ativa as caspases iniciadoras e executoras, que degradam as proteínas celulares e induzem a apoptose.

O TNF-α também ativa o fator de transcrição NF-κB, que induz a expressão gênica inflamatória, levando à liberação de enzimas que degradam a matriz extracelular do IVD.

Além disso, a intensa carga de pressão induz estresse mecânico, degradando ainda mais o DIV.

Isso reduz a altura do DIV em comparação com controles não tratados, estabelecendo um modelo degenerativo e pró-inflamatório da doença do DIV em estágio inicial.

Após o primeiro ciclo de carregamento dinâmico no primeiro dia, coloque diretamente os IVDs em uma placa de Petri na posição vertical e estabilize-os com uma pinça. Injete TNF alfa recombinante com uma agulha de insulina de calibre 30, lentamente a uma velocidade de aproximadamente 70 microlitros por minuto nos IVDs do grupo patológico. Após a injeção, puxe a seringa até a metade para trás e puxe o êmbolo para criar um vácuo que evite que a solução injetada vaze. Em seguida, remova a seringa completamente do IVD.