Fabricação de microesferas de polímero liberador de beta-amilóide para modelagem da doença de Alzheimer

Pegue uma suspensão de células que secretam beta-amilóide neurotóxica misturada com um polímero biocompatível.

Conecte a seringa com a suspensão a um dispositivo de fabricação de microesferas e, em seguida, empurre-a como um fluxo contínuo de líquido.

Uma frequência de vibração no dispositivo quebra o fluxo em gotículas uniformes do tamanho de mícrons.

Essas gotículas passam por um campo eletrostático e adquirem cargas uniformes para se repelirem, impedindo a fusão.

As gotículas então caem em um banho de gelificação contendo íons de cálcio. Os íons reticulam o polímero, encapsulando as células em microesferas esféricas.

Incube as esferas para completar a gelificação e, em seguida, colete-as em um filtro.

Inverter o filtro sobre um tubo, adicionar um meio de cultura para lavar os grânulos para dentro do tubo e transferir a suspensão para um frasco que contenha o meio.

A matriz polimérica permite o acesso a nutrientes para apoiar a proliferação celular, permitindo a liberação lenta de beta-amilóide, imitando o acúmulo crônico observado em um cérebro com doença de Alzheimer.

Para fabricar as microesferas, em uma seringa de 20 mililitros, carregue cinco mililitros da suspensão de alginato celular e conecte uma seringa ao encapsulador. Para iniciar o encapsulador, ative o fluxo, que empurrará a suspensão de alginato celular através do alimentador, e um fluxo de gotículas será extrudado através do bico. Recolha o primeiro mililitro no copo de resíduos para evitar o fluxo inicial não uniforme. Em seguida, continue a executar os quatro mililitros restantes, permitindo que as gotículas caiam no banho de gelificação de cloreto de cálcio.

Ao entrar em contato com o banho de gelificação, o alginato nas gotículas se reticula instantaneamente com os íons de cálcio no banho de gelificação, formando microesferas esféricas. Após um minuto, remova o béquer de gelificação da plataforma magnética e deixe as microesferas descansarem por mais quatro minutos sem agitação para completar sua gelificação à temperatura ambiente. Para recuperar as microesferas, primeiro use uma pinça estéril para remover quaisquer detritos ou artefatos grandes de alginato. Depois de cortar a ponta de uma pipeta de plástico, use-a para transferir as microesferas do banho de gelificação para um filtro de malha de 74 micrômetros mantido sobre um copo de resíduos.

Para garantir o sucesso, sempre cortamos a ponta de uma pipeta de plástico para evitar danificar as microesferas e fazemos isso toda vez que transferimos as esferas de um recipiente para outro após o encapsulamento.

Inverta o filtro de malha sobre um tubo de centrífuga. Pipetar o meio de cultura adequado sobre ele para lavar as esferas pelo tubo e deixá-las equilibrar-se nesse meio durante cinco minutos. Em seguida, transfira-os para um balão previamente cheio com o meio apropriado para incubação e outros experimentos.