Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:42 min. • July 8th, 2025
Coloque as mitocôndrias isoladas das células do neuroblastoma em um tampão contendo corante fluorescente impermeável à membrana e ligante ao cálcio.
Incubar para permitir que as mitocôndrias se estabilizem no tampão.
Adicione tampão contendo cálcio e incube com agitação.
Os íons de cálcio se ligam às moléculas do corante, causando sua fluorescência.
Usando um espectrômetro de fluorescência, monitore a fluorescência do corante em tempo real.
Agora, injete tampão contendo cálcio em intervalos regulares.
O aumento da concentração de cálcio promove a absorção de cálcio mitocondrial, reduzindo os íons de cálcio livres disponíveis para se ligar ao corante, o que resulta em diminuição da fluorescência.
Uma vez que as mitocôndrias atingem sua capacidade máxima de armazenamento de cálcio, a adição adicional de cálcio desencadeia a abertura do poro de transição de permeabilidade mitocondrial (mPTP).
Essa abertura de poros libera cálcio das mitocôndrias para o tampão, onde se liga ao corante e causa aumento da fluorescência.
Determine a quantidade total de cálcio necessária para induzir a abertura do mPTP, que reflete a capacidade de retenção de cálcio mitocondrial.
Preparar o meio de cloreto
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