Imuno-histoquímica de seções de tecido cerebral de camundongos para direcionar neurônios dopaminérgicos

Pegue uma lâmina revestida de polímero com seções de tecido cerebral de camundongo contendo neurônios dopaminérgicos que expressam tirosina hidroxilase, uma enzima chave para a síntese de dopamina.
Contorne as seções com uma caneta hidrofóbica para garantir uma coloração uniforme.
Fixe o tecido em uma solução de acetona-metanol para preservar a morfologia do tecido.
Enxágue com tampão contendo detergente para permeabilizar as membranas celulares.
Incube com anticorpos primários direcionados à tirosina hidroxilase nos neurônios dopaminérgicos e, em seguida, lave para remover os anticorpos não ligados.
Adicione anticorpos secundários marcados com corante fluorescente, corante nuclear e inibidores de RNase.
Durante a incubação, os anticorpos secundários se ligam aos anticorpos primários, os corantes nucleares marcam o núcleo e os inibidores de RNase inativam as RNases.
Enxágue com tampão. Em seguida, desidrate as seções de tecido em concentrações crescentes de etanol.
Incube em xileno para limpar o tecido.
As seções de tecido processadas estão agora prontas para microdissecção por captura a laser, que permite a visualização precisa e a dissecção dos neurônios alvo da dopamina.

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