Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:13 min. • April 28th, 2025
Comece conectando a ponta de impacto e a ponta da sonda a um dispositivo de impacto.
Em seguida, prenda um mouse anestesiado em um quadro estereotáxico.
Posicione a ponta de impacto entre as suturas interfrontal e lambdoide, alinhada verticalmente com uma linha horizontal imaginária entre as orelhas.
Zero os canais X e Y no painel de controle estereotáxico para evitar o deslocamento do centro de impacto ao trocar as pontas.
Mova manualmente a ponta da sonda para o centro de impacto e abaixe-a para tocar o local de impacto. Prenda um sensor de contato na cauda do mouse.
Zero o canal Z e, em seguida, reposicione a ponta de impacto até que X e Y sejam zero e Z leia menos quatro.
Aplique o impacto em uma velocidade específica.
Meça a apneia - o tempo desde o impacto até a primeira respiração do camundongo - para determinar a gravidade da lesão.
Permite que o mouse se recupere.
Repita o impacto em intervalos especificados. Impactos repetidos rompem os vasos sanguíneos no cérebro, causando microssangramentos e desencadeando a ativação dos astrócitos, imitando uma leve concussão humana.
Comece anexando uma ponta de metal revestida de borracha de silicone feita sob medida a um dispositivo de impacto estereotáxico eletromagnético. Tomando cuidado para que o fundo plano da ponta revestida fique paralelo à superfície da ponta da sonda do dispositivo de impacto. Em seguida, coloque um mouse anestesiado na posição de bruços em uma almofada de aquecimento e confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé.
Em seguida, use um aparador de cabelo para raspar completamente a cabeça e aplique pomada nos olhos do animal. Quando o animal estiver pronto, predefina a velocidade do dispositivo de impacto para 4 metros por segundo e o tempo de permanência para 240 milissegundos na caixa de controle. Coloque uma almofada de aquecimento macia sob o corpo do animal, para manter a temperatura corporal perto de 39 graus Celsius.
Em seguida, use as barras auriculares sem corte para montar o mouse no quadro estereotáxico, na posição de bruços. Use o driver z para abaixar a ponta de impacto, perto da cabeça do mouse. Mova os drivers x e y, no meio do caminho para as coordenadas alvo, acima da sutura sagital, para ajustar a ponta de impacto plano de 9 milímetros de diâmetro.
Tomando cuidado para que uma borda da ponta de impacto fique verticalmente paralela a uma linha horizontal imaginária, desenhada entre as duas orelhas. Para definir corretamente a profundidade de impacto, primeiro defina os canais x e y no painel de controle estereotáxico digital para zero, para garantir que não haja deslocamento do centro de impacto após a troca das pontas.
Em seguida, mova a ponta da sonda adicional para o local de impacto do cérebro do camundongo. Ajuste manualmente os drivers x e y para mover a ponta da sonda para o centro da área de impacto e prenda um sensor de contato na cauda. Use o driver z para mover o impactor para baixo, até que a ponta da sonda toque a superfície do local do impacto, e ajuste o canal z no painel de controle estereotáxico para zero.
Em seguida, use os drivers x e y para mover manualmente a ponta de impacto de volta para a área de impacto, até que os drivers x e y sejam zero. Em seguida, mova a unidade z para baixo até que o painel de controle que mostra o driver z esteja em 4,00 negativos. E mova a chave de retração na caixa de controle para retrair o atuador.
Agora, clique no botão de impacto na caixa de controle para acionar um impacto com uma profundidade de deformação de 4 milímetros e use um cronômetro para medir o tempo desde o impacto até a primeira respiração do mouse. Em seguida, transfira o animal para uma almofada quente, com monitoramento até que esteja totalmente recuperado.