Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
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Comece com um camundongo anestesiado com uma artéria carótida comum exposta ou CCA.
A CCA se bifurca na artéria carótida externa, ou ECA, fornecendo sangue para a face, e na artéria carótida interna, ou ICA, fornecendo sangue para o cérebro.
Primeiro, coloque uma sutura ao redor do ECA e aperte-o.
Em seguida, adicione uma sutura apertada no CCA abaixo do local da injeção para bloquear o fluxo sanguíneo.
Insira uma tira de papel úmida sob o CCA para suporte.
Coloque um nó solto acima do local da injeção e injete células cancerígenas no CCA.
Devido ao ECA suturado, as células viajam para o ICA para alcançar o cérebro.
Após a injeção, remova a agulha e aperte o nó distal do CCA para evitar o refluxo.
Finalmente, apare as suturas, remova a tira, enxágue com solução salina e feche a ferida.
Com o tempo, as células cancerígenas migradas se propagam e desenvolvem tumores no cérebro.
Posicione uma pinça fina sob a artéria carótida externa e passe uma sutura de seda 5-0 sob a artéria. Dê um nó e aperte a sutura e corte o excesso de linha. Posicione uma pinça fina sob a artéria carótida comum e passe uma sutura de seda 5-0 sob a artéria.
Dê um nó e aperte a sutura em uma posição próxima ao local de injeção proposto. Corte o excesso de sutura, deixando cerca de 10 milímetros da linha. Corte e umedeça uma tira de limpadores descartáveis de baixo fiapo com cerca de 10 por 5 milímetros.
Dobre a tira e coloque-a sob a artéria carótida no local proposto para a injeção. Isso apoiará o vaso durante a injeção. Na artéria carótida comum rostral ao local de injeção proposto, coloque uma terceira ligadura com um nó solto. Isso é apertado somente após a injeção.
Agite suavemente a suspensão celular e coloque 200 microlitros de suspensão celular em uma seringa de insulina com uma agulha de calibre 31. Coloque a seringa no driver da seringa conectado a um pedal ativador.
Conecte uma cânula fina com uma agulha de calibre 31 à seringa e prepare a linha. Verifique se a artéria carótida está bem posicionada e pressurizada. Usando duas pinças de ângulo fino, uma tensionando suavemente a extremidade da primeira ligadura e a outra segurando a agulha de calibre 31, insira lentamente a agulha com o chanfro no lúmen do vaso sanguíneo, tomando cuidado para não perfurá-la.
Injete lentamente 100 microlitros de suspensão celular preparada anteriormente na artéria carótida comum a 10 microlitros por segundo. Isso entregará 2,5 vezes 10 às quintas células no vaso sanguíneo. A injeção bem-sucedida pode ser visualizada através da limpeza do sangue do vaso sanguíneo carotídeo.
Levante e aperte suavemente a ligadura solta imediatamente após retirar a agulha para evitar refluxo e sangramento. Apare o excesso de suturas e remova o pedaço de limpadores descartáveis umedecidos e com baixo teor de fiapos.
Usando uma pipeta P200, enxágue a cavidade cirúrgica duas vezes com 150 a 200 microlitros de água estéril ou soro fisiológico. Depois de verificar se há sangramentos, reposicione os tecidos moles, as glândulas salivares e a pele sobre a artéria carótida e a traqueia. Feche a camada de pele da incisão usando um porta-agulha de sutura, fórceps e uma sutura de monofilamento 6-0 absorvível ou não absorvível em um padrão contínuo.