Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:47 min. • April 28th, 2025
Comece com peptídeos derivados de grânulos de neuromelanina (NMGs) isolados de tecido cerebral humano post-mortem.
NMGs, encontrados em neurônios produtores de dopamina, contêm pigmento, proteínas e lipídios de neuromelanina.
Pegue uma coluna de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) contendo uma fase estacionária à base de sílica funcionalizada com ligantes hidrofóbicos.
Carregue os peptídeos na coluna.
Os peptídeos hidrofóbicos ligam-se mais fortemente à coluna do que os hidrofílicos.
Passe um buffer de eluição pela coluna.
Peptídeos menos hidrofóbicos eluem primeiro, enquanto os mais hidrofóbicos eluem depois.
Os peptídeos eluídos entram na fonte de ionização por eletrospray do espectrômetro de massa, onde são ionizados em íons peptídicos carregados.
Os peptídeos ionizados entram no analisador de massa, onde são separados com base em suas relações massa-carga.
Um íon peptídico selecionado é direcionado para a célula de colisão e fragmentado em íons menores, cujas relações massa-carga são medidas novamente.
Por fim, os dados são comparados a um banco de dados de referência para identificar as proteínas presentes na amostra de NMG.
Depois de realizar a digestão tríptica, conforme d
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