Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:38 min. • April 28th, 2025
Pegue os esferóides do tumor neuroendócrino do intestino delgado em um tubo.
Adicione uma solução fixadora para preservar as células.
Para lavar, centrifugar e substituir o fixador por tampão.
Centrifugue e descarte o sobrenadante para remover qualquer fixador restante.
Adicione um tampão contendo detergente e um agente bloqueador para permeabilizar as membranas celulares e evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Lave com tampão para remover o excesso de detergente e agente bloqueador.
Incubar com anticorpos primários, que se ligam à proteína-alvo específica da célula neuroendócrina.
Lave com tampão para remover anticorpos não ligados.
Adicione anticorpos secundários marcados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.
Enxágüe com tampão para remover o excesso de anticorpos.
Adicione um meio de montagem contendo um corante para manchar o núcleo.
Transfira os esferoides para uma lâmina e monte com uma lamínula.
Use um microscópio de fluorescência para visualizar células neuroendócrinas do esferóide expressando proteínas específicas.
Fixe os organoides adicionando 500 microlitros de paraformaldeído e incubando-os por 15 minutos. Após a incubação, lave a cultura duas vezes com
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