Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:42 min. • April 28th, 2025
Pegue um rato anestesiado com uma pata traseira raspada. Incisar do meio da panturrilha ao tornozelo, expondo o músculo.
Disseque a camada de tecido conjuntivo para revelar o nervo tibial.
Crie um túnel subcutâneo sob a pele. Transeccione o nervo para induzir lesão.
Passe a extremidade proximal do nervo cortado através do túnel e suture-o até a extremidade distal do túnel, posicionando o nervo subcutaneamente.
Feche a incisão, limpe a área e permita que o rato se recupere.
Após a transecção, o nervo degenera à medida que os axônios e as bainhas de mielina se quebram.
As células de Schwann desnervadas liberam moléculas de sinalização para atrair macrófagos para a eliminação de detritos, após o que o nervo cortado envia protuberâncias axonais para promover a regeneração.
Sem estruturas-alvo adequadas para reinervar, axônios desorganizados formam um neuroma, uma massa de axônios, células de Schwann, fibras de colágeno e vasos sanguíneos.
Os axônios em regeneração liberam moléculas que excitam os nociceptores próximos, sinalizando a dor
Localize o joelho e faça suavemente uma incisão longitudinal de 2 a três centímetros sobre o lado medial da pata traseira, do meio da panturrilha ao tornozelo, usando um bisturi. Se necessário, abra ainda mais a pele e a subcutânea com uma microtesoura até que as camadas musculares fiquem visíveis. Identifique o feixe neurovascular superficial como duas a três linhas brancas, roxas ou vermelhas que podem se mover livremente sobre as camadas musculares. Mantenha o feixe neurovascular intacto. Disseque a parte posterior deste feixe.
Em seguida, disseque para abrir a fáscia entre os músculos gastrocnêmios. Entre a fáscia dos músculos, encontra-se o feixe neurovascular mais profundo com o nervo tibial, que é cerca de três vezes o tamanho do feixe neurovascular superficial. Use o osso tibial como um ponto de referência adicional, pois o nervo tibial fica logo posterior ao osso tibial. Para dissecar o nervo tibial dos feixes vasculares circundantes, mova sem rodeios o nervo tibial e corte o tecido exposto que mostra algum alongamento enquanto move o nervo tibial.
Uma vez que todo o nervo tibial esteja exposto, coloque as camadas musculares para trás para evitar a desidratação do nervo até a dissecção da pele pré-tibial do músculo subcutâneo. Para dissecar a pele pré-tibial da camada muscular subcutânea e fazer um túnel subcutâneo, segure a pele e empurre a ponta romba no tecido paralelo à pele, usando uma ferramenta de microcirurgia romba. Certifique-se de que a extremidade do túnel esteja localizada pré-tibial ou lateralmente para facilitar a acessibilidade da área para teste do neuroma.
Após cortar o nervo tibial na extremidade distal perto do tornozelo, altere a ampliação do microscópio para 10x ou 16x e identifique o epineuro do nervo tibial proximal ao corte feito próximo ao tornozelo, ou no caso de uma bifurcação mais proximal do nervo tibial, identifique o epineuro dos ramos plantares medial e lateral proximal ao corte feito próximo ao tornozelo. Coloque cuidadosamente um 8-0 sutura de náilon através do epineuro da extremidade nervosa proximal, segurando o epineuro com uma pinça e colocando a agulha entre o nervo e o epineuro com uma mordida de aproximadamente 0,5 milímetros.
Dê uma mordida com a agulha por via subcutânea no final do túnel subcutâneo e puxe a sutura para transpor o nervo lateralmente para o túnel subcutâneo. Fixe a sutura fazendo um nó. Coloque uma sutura mais espessa de 4-0 com uma cor escura nivelada com a extremidade nervosa fixada sem penetrar na pele. Certifique-se de que a sutura esteja visível fora da pele.
Verifique se o nervo permanece no lugar depois de mover a pata e os músculos. Corte as extremidades da sutura com uma extremidade de sutura ligeiramente mais longa no sulco do que no 8-0 sutura. Altere a ampliação do microscópio de volta para 6x e feche a pele com suturas intraepidérmicas, usando o botão 8-0 sutura. Limpe suavemente a pele com cloreto de sódio a 0,9% usando um cotonete.
Se a sala estiver fria, coloque uma almofada de aquecimento, sob uma parte de uma gaiola limpa e coloque o rato na gaiola sob uma toalha de papel em uma posição confortável. Garanta fácil acesso a alimentos e água.