Ensaio de fagocitose de células vivas de células semelhantes à microglia usando sinaptossomos humanos

Pegue uma placa de vários poços contendo células semelhantes à microglia exibindo atividade fagocítica.

Incube com uma coloração nuclear para rotular os núcleos.

Adicione um inibidor de polimerização de actina ao poço de controle negativo.

Durante a incubação, o inibidor se liga aos filamentos de actina, inibindo a polimerização e fagocitose da actina.

Mantenha a placa em baixas temperaturas e adicione sinaptossomos humanos marcados com corante sensível ao pH - fragmentos isolados de terminais sinápticos neurais.

Centrifugue a placa a baixas temperaturas para promover as interações célula-sinaptossomo, mas evitar a absorção prematura.

Transfira a placa para um sistema de imagem de células vivas.

No poço de teste, os sinaptossomos são fagocitados e se fundem com os lisossomos formando fagolisossomos. O ambiente ácido lisossômico ativa o corante, resultando em sua fluorescência.

Com o tempo, no poço de teste, mais sinaptossomos são engolfados, causando um aumento adicional na fluorescência.

No entanto, no poço de controle negativo, a polimerização da actina é inibida, impedindo a captação de sinaptossomas. A fluorescência mínima resultante confirma a dependência da fluorescência na fagocitose