Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:06 min. • April 28th, 2025
Pegue uma retina quimicamente fixada isolada do olho de um rato.
O olho exibe danos induzidos pelo calor no plexo vascular límbico, uma rede de vasos sanguíneos ao redor da córnea.
Este dano bloqueia a drenagem de fluidos, aumentando a pressão intraocular (PIO) e causando degeneração das células ganglionares da retina (RGC).
Trate a retina com uma solução de permeabilização para permeabilizar as membranas celular e nuclear.
Aplique uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Remova a solução de bloqueio.
Introduza anticorpos primários que têm como alvo um fator de transcrição predominantemente expresso em RGCs.
Lave para remover anticorpos não ligados.
Introduza anticorpos secundários conjugados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.
Lave para remover anticorpos não ligados.
Contra-core os núcleos com um corante de ligação ao DNA.
Lave a retina e monte-a em uma lâmina de vidro usando um meio de montagem apropriado.
Visualize a retina sob um microscópio de epifluorescência.
Uma densidade celular reduzida no olho danificado em comparação com o controle confirma a degeneração do RGC devido ao aumento da PIO.
Depois de isolar as retinas, transfira-as
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