Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:52 min. • April 28th, 2025
Prenda um mouse anestesiado e preparado em uma estrutura estereotáxica com o crânio exposto.
Identifique os pontos de referência do crânio. Em seguida, posicione um aparelho de apoio de cabeça sob a cabeça do animal e infle-o para evitar danos aos ouvidos.
Alinhe um impactor eletromagnético guiado estereotaxicamente sobre a cabeça.
Redefina as coordenadas estereotáxicas para alinhar com precisão a sonda do impactor sobre o alvo. Conecte um sensor de contato ao ouvido do animal.
Assim que a sonda tocar o crânio, retraia-o. Defina a profundidade de impacto desejada e inicie o impacto com os parâmetros apropriados.
A sonda fornece uma força controlada ao crânio, induzindo alongamento axonal e cisalhamento em neurônios corticais, o que leva a uma lesão cerebral traumática leve.
Meça o tempo de endireitamento do animal, o tempo necessário para recuperar a posição normal do corpo após a lesão.
Avalie o mouse quanto a fraturas cranianas visíveis.
Em seguida, remova o mouse do quadro, feche a incisão e aplique antibióticos.
Permite que o mouse se recupere.
Prenda o mouse na estrutura estereotáxica usando barras auriculares leves de resina acetal, pontiagudas, uma barra de mordida e uma máscara de anestesia para camundongos. Em seguida, monitore cuidadosamente a respiração do mouse para garantir a profundidade da anestesia. Aplique lubrificante ocular estéril nos olhos para evitar o ressecamento da córnea. Esterilize o couro cabeludo com cotonetes de iodopovidona.
Depois de garantir a profundidade da anestesia, faça uma incisão no couro cabeludo na linha média de aproximadamente 1 centímetro entre os olhos e o pescoço usando um bisturi, expondo o crânio. Deixe o crânio secar por 1 a 2 minutos e, em seguida, identifique o bregma e o lambda. Em seguida, coloque o aparelho de apoio de cabeça sob a cabeça e infle o bulbo com água até que ele pressione a parte inferior da cabeça do mouse, mas não levante a cabeça para longe da barra de mordida.
Mova o impactador para o lugar sobre a cabeça do mouse. Estender o pêndulo colocando o interruptor de alavanca de extensão-retração em extensão. Em seguida, alinhe o impactor até que esteja centralizado sobre o bregma. Redefina as coordenadas x e y estereotáxicas digitais no leitor estereotáxico para 0. Em seguida, alinhe a sonda sobre o local do impacto, movendo-a do bregma para as coordenadas do alvo como medial lateral a 0 milímetro e anterior posterior a menos 1,6 milímetros.
Clique o sensor de contato na orelha do mouse. Abaixe lentamente a ponta da sonda com a sonda estendida até que o primeiro contato com a superfície seja feito. Pare no bipe. Em seguida, redefina as coordenadas z estereotáxicas digitais no leitor estereotáxico para 0.
Inspecione cuidadosamente se a ponta está nivelada com o crânio. Em seguida, retrair o pêndulo colocando o interruptor de alavanca na caixa de comando na posição de retração. A ponta se retira e não tem mais contato com a cabeça até o momento do impacto. Defina a profundidade do impacto ajustando a profundidade ventral dorsal para menos 1,2 milímetros. Monitore cuidadosamente a respiração do mouse para garantir a profundidade da anestesia e ajuste o nível de gás conforme necessário.
Induza o impacto pressionando o botão direito para impactar. A ponta da sonda desce na velocidade exibida, permanece abaixada pelo tempo de permanência definido e se retrai. Inicie o cronômetro imediatamente após o ferimento na cabeça ou impacto do CHI para registrar os tempos de endireitamento. O tempo médio do reflexo de endireitamento é de 5 a 15 minutos.
Avalie o mouse quanto a fraturas cranianas visíveis, hemorragias e apneia. Remova o mouse do quadro estereotáxico. Feche o couro cabeludo grampeando a pele. Em seguida, aplique pomada antibiótica tripla com um aplicador estéril com ponta de algodão na incisão fechada. Retorne o mouse para uma gaiola limpa para recuperação.