Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:31 min. • April 28th, 2025
Tome fibrina reidratada embebida em gel, fixada e permeabilizada com tecido fibrovascular doente derivado do paciente. Este tecido contém estruturas neovasculares irregulares com células endoteliais e pericitos.
Trate o tecido com uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Incubar com anticorpos primários direcionados a proteínas de superfície em células endoteliais e pericitos.
Enxágue com tampão para remover os anticorpos não ligados e, em seguida, incube no tampão.
Após a lavagem do tampão, incube com anticorpos secundários conjugados com corante fluorescente para se ligar aos anticorpos primários.
Lave com tampão para remover o excesso de anticorpos e incube em tampão.
Após a lavagem do tampão, adicione um corante nuclear para corar os núcleos das células. Enxágüe com tampão e água deionizada para remover o corante não ligado.
Transfira o tecido para uma lâmina de microscópio.
Aplique a mídia de montagem e sele com uma lamínula contendo a mídia de montagem de endurecimento rápido.
Após a secagem ao ar, armazene a lâmina em baixa temperatura. Em seguida, faça a imagem do tecido sob um microscópio de epifluorescência para visualizar o arranjo espacial das
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