Gerando uma oclusão da artéria cerebral média em um filhote de rato para induzir isquemia cerebral local

Comece com um filhote de rato anestesiado seguro em uma almofada de aquecimento.

Esterilize a área cervical alternadamente com etanol e iodopovidona. Administre anestesia local no local da incisão.

Faça uma incisão cervical, expondo a artéria carótida comum.

Coloque os afastadores para garantir o acesso livre.

Identifique a artéria carótida interna ou ACI e remova o tecido circundante.

Amarre uma ligadura ao redor da base do ICA e retraia-a para interromper temporariamente o fluxo sanguíneo.

Coloque uma segunda ligadura solta no ICA.

Faça uma incisão entre as ligaduras.

Pegue uma sutura de oclusão de náilon revestida de silicone e insira-a através da incisão até atingir a artéria cerebral média ou MCA.

Isso bloqueia o fluxo sanguíneo para a ACM, induzindo isquemia local no cérebro.

Amarre a ligadura ao redor da sutura de oclusão para prendê-la.

Feche o local da incisão. Permita que o filhote se recupere antes de estudos adicionais.

Depois de anestesiar o filhote com isoflurano inalado de acordo com os protocolos aprovados, certifique-se de que não haja resposta a um beliscão no pé. Mantenha a temperatura da superfície corporal com o uso de uma almofada de aquecimento durante a fase cirúrgica. Prenda o animal em decúbito dorsal com fita adesiva nas regiões dos ombros.

Use cotonetes estéreis para esfregar a área cervical anterior com etanol a 70%, seguido por um cotonete de solução de iodopovidona. Em seguida, infiltre localmente a bupivacaína a 0,25% no local da incisão planejada. Em seguida, enquanto trabalha com um estereoscópio, faça uma incisão cervical anterior de 5 a 7 milímetros na linha média para expor a artéria carótida comum.

Coloque 2 a 4 afastadores para manter a cavidade aberta e a artéria exposta. Em seguida, localize a artéria carótida interna, a artéria occipital e a artéria carótida externa. Remova o tecido conjuntivo e a gordura das artérias para obter uma visão clara.

Depois de cortar 1,5 centímetros de fio de sutura trançado de seda 6-0. Destrance a sutura, puxando fios simples. Certifique-se de que os fios individuais estejam limpos e não desgastados.

Enquanto segura o fio de sutura com uma pinça de 45 graus, varra a pinça em um arco sob a ACI para que as pontas surjam entre a ACI e a OA. Em seguida, pegue a ponta do fio de sutura e puxe-o para que a extremidade seja de fácil acesso. Solte o fio da pinça e retire a pinça de baixo do ICA, invertendo o movimento anterior.

Amarre uma ligadura temporária ao redor do ICA na base mais próxima de onde ele se separa do CCA. Retraia cuidadosamente a ACI lateralmente e, em seguida, use um clipe para prender o fio retrátil ao excesso de pele próximo à região da axila no lado oposto à incisão. Certifique-se de que o fio retrátil esteja esticado o suficiente para interromper o fluxo sanguíneo antes de prosseguir para a próxima etapa.

A artéria deve ser plana e pálida. Use uma pinça de 45 graus para segurar outro fio de sutura não trançado e enrole-o sob e ao redor da ACI como antes. Posicione este fio lateralmente ao fio de retração.

Em seguida, corte uma arteriotomia de 0,2 milímetro, a meio caminho entre as ligaduras amarradas e não amarradas, estão mais próximas da ligadura amarrada. Agora, usando uma régua métrica, meça 10 milímetros de sutura de náilon revestida de silicone como sutura de oclusão. Corte a sutura com uma margem extra de 2 a 3 milímetros para remoção durante a reperfusão.

Segure a sutura de oclusão com uma pinça de 45 graus e use uma pinça reta para criar uma curva, marcando o ponto de parada do avanço. Introduza a sutura de oclusão na arteriotomia, apontando-a paralelamente à ECA e em direção à cabeça. Avance suavemente a sutura até que a dobra seja alcançada. Em seguida, use a mecha posicionada lateralmente à fita de retração para amarrar uma ligadura temporária para prender a sutura da oclusão. Remova o clipe retrator. Em seguida, apare os fios de ambas as ligaduras temporárias, deixando o fio que será usado para remover o nó mais longo do que o fio usado para apertá-lo. Remova os retratores. E feche a cavidade usando seda trançada 6-0 para criar três ou quatro suturas interrompidas.

Remova o filhote da anestesia e coloque-o em uma almofada de aquecimento ao ar ambiente. Monitore o filhote até que ele recupere a consciência suficiente para manter a decúbito esternal e certifique-se de que ele esteja totalmente recuperado antes de devolvê-lo à barragem.