Imagens de alta resolução de receptores de neurotransmissores em sinapses retinianas

Faça uma seção de retina de camundongo em uma grade de microscopia eletrônica. A seção contém células ganglionares da retina, ou RGCs, sinapticamente ligadas a células bipolares. As

células bipolares pré-sinápticas contêm vesículas de neurotransmissores dispostas em uma estrutura de fita perto da membrana sináptica.

Os

RGCs pós-sinápticos exibem receptores de neurotransmissores agrupados em sua membrana. Essas células são marcadas com a subunidade B ou CTB da toxina da cólera. Lave

com um tampão para manter o pH.

Incube com um buffer de bloqueio para mascarar locais de ligação não específicos.

Incubar com anticorpos primários direcionados aos receptores de neurotransmissores e CTB.

Lave com um tampão para remover anticorpos não ligados e manter o pH.

Incubar com anticorpos secundários conjugados a nanopartículas de ouro de diferentes tamanhos, que se ligam aos anticorpos primários, marcando as moléculas-alvo. Remova os

anticorpos não ligados e seque a amostra ao ar.

Aplique metais pesados que ligam macromoléculas, aumentando o contraste.

Usando microscopia eletrônica, identifique os RGCs usando os CTBs marcados e localize os receptores de neurotransmissores marcados.

Nesta etapa, corte s