Monitoramento em tempo real da ativação do receptor de odor em células recombinantes

Comece com uma placa de vários poços contendo células de mamíferos recombinantes aderentes em uma solução de estimulação suplementada com luciferina, um substrato luminescente.

Incubate para permitir a entrada de luciferina na célula.

Essas células expressam receptores de odor ligados à membrana acoplados a proteínas G olfativas e proteínas transportadoras de receptores.

Além disso, as células expressam proteínas Glosensor citoplasmáticas, proteínas luminescentes sensíveis ao AMP cíclico.

Adicione uma solução odorizante vaporizável no espaço entre os poços e coloque a placa dentro de um instrumento luminômetro pré-equilibrado com o mesmo odorante.

Inicie a medição de luminescência.

As moléculas odoríferas ligam-se aos receptores odoríferos das células, ativando a proteína G acoplada e dissociando a subunidade α da proteína G, ou Gα.

A subunidade Gα dissociada liga-se à enzima adenilato ciclase incorporada na membrana, ativando-a. A enzima ativada converte os ATPs em AMPs cíclicos.

Esses AMPs cíclicos se ligam a proteínas glossensoras, alterando sua conformação e permitindo a ligação da luciferina.

Essa interação produz luminescência, confirmando a ativação de receptores de odor.

Adicion