Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:56 min. • April 28th, 2025
Comece com uma seção cerebral de primatas não humanos quimicamente fixada.
O fixador à base de aldeído reticula proteínas, preservando a estrutura do tecido, mas deixa alguns resíduos de aldeído reativos.
Lave para remover a camada crioprotetora ao redor da seção de tecido.
Adicione um agente redutor para neutralizar os grupos aldeídos reativos, produzindo subprodutos de reação.
Lave para remover esses subprodutos e excesso de agentes redutores.
Aplique uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Adicione anticorpos primários direcionados a uma proteína expressa em locais específicos da membrana neuronal.
Lave para remover anticorpos não ligados.
Adicione anticorpos secundários biotinilados direcionados aos anticorpos primários.
Lave para remover os anticorpos não ligados.
Sobreponha com complexos avidina-biotina-peroxidase que se ligam aos anticorpos secundários.
Lave novamente para remover os complexos não ligados.
Introduza um substrato cromogênico junto com peróxido de hidrogênio. Na presença de peróxido de hidrogênio, a enzima peroxidase oxida o substrato, formando precipitados marrons.
Comece transferindo seções de 50 mícrons de espessura do cérebro de
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