Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:59 min. • April 28th, 2025
Pegue uma lâmina contendo criosecções de tecido coronal de rato fixo e permeabilizado.
Contorne as seções com uma caneta hidrofóbica para criar um ambiente de coloração controlado.
Transfira as seções para uma câmara de umidade para evitar o ressecamento de reagentes e tecidos durante as etapas subsequentes.
Trate as seções com proteínas séricas para bloquear locais de ligação não específicos.
Enxágüe com tampão para remover o excesso de proteínas séricas.
Incubar com anticorpos primários direcionados a proteínas específicas na microglia e nos neurônios.
Lave com tampão para remover anticorpos primários não ligados.
Incubar com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.
Lave com tampão para remover anticorpos secundários não ligados. Em seguida, enxágue com água bidestilada
Aplique um meio de montagem aquoso para proteger o sinal fluorescente, coloque uma lamínula e feche-a.
Visualize as seções sob um microscópio de fluorescência para visualizar microglia e neurônios imunomarcados.
Seque as bordas das lâminas e faça uma borda repelente de líquidos ao redor da borda da lâmina com uma caneta de papanicolau, para garantir uma cobertura uniforme do lí
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