Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:36 min. • April 28th, 2025
Pegue um slide com seções embebidas em parafina de neuroesferas de tumores cerebrais, aglomerados de células-tronco neurais exibindo biomarcadores de proteínas nucleares específicas do tumor.
Aqueça para derreter a parafina, remova-a usando xileno e reidratie o tecido usando concentrações decrescentes de álcool.
Aqueça em um tampão ácido contendo detergente para desmascarar epítopos nos biomarcadores e permeabilizar as membranas celulares.
Enxágüe e trate com um agente oxidante para inativar as enzimas peroxidase endógenas, evitando sinais inespecíficos.
Aplique uma solução de bloqueio para mascarar locais de ligação não específicos.
Incube com anticorpos primários direcionados aos epítopos dos biomarcadores.
Enxágue e trate com anticorpos secundários conjugados com biotina que se ligam aos anticorpos primários.
Enxágue e incube com uma avidina conjugada com enzima peroxidase, que se liga à biotina.
Adicione um substrato cromogênico e um agente oxidante.
A peroxidase utiliza o agente para converter o substrato em precipitados coloridos, rotulando a localização do biomarcador.
Contra-core os núcleos, desidrate o tecido em álcool e monte a lâmina para obter imagens da distribuição do biomarca
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