JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:08 min • April 28th, 2025
Comece com uma amostra de tecido cerebral, que não é transparente devido à presença de pigmentos e lipídios. Esses componentes causam dispersão de luz em neurônios marcados com fluorescência.
Incube sequencialmente o tecido em soluções com concentrações crescentes de metanol para remover a água dele e desidratar o tecido gradualmente.
Em seguida, trate este tecido com metanol concentrado para eliminar a água residual, garantindo a desidratação completa.
Em seguida, transfira o tecido para um solvente de limpeza inicial contendo diclorometano e metanol.
Incube com agitação suave para permitir que o solvente penetre profundamente no tecido.
O diclorometano remove pigmentos e lipídios do tecido, reduzindo a dispersão da luz e aumentando a transparência.
Finalmente, transfira o tecido para éter dibenzílico, um solvente hidrofóbico e incube sem agitar.
O solvente atua como o agente de limpeza final que aumenta ainda mais a transparência do tecido.
Este processo melhora a penetração da luz, permitindo uma visualização mais clara dos neurônios marcados e suas conexões no tecido cerebral amostra.
Incube a amostra em série em metanol a 20%, 40%, 60%, 80% e 100% por uma hora cada à temperatura ambiente. Em seguida, incube-o em metanol 100% fresco durante a noite. No dia seguinte, incubar a amostra em DCM a 66% recém-preparado em metanol a 33% por três horas em temperatura ambiente com agitação. Após três horas, incubar a amostra em éter dibenzílico sem agitar até que esteja límpida. Em seguida, armazene-o em éter dibenzílico até a imagem.