Imagem de bioluminescência da neuroinflamação em um camundongo transgênico

Comece com um camundongo transgênico anestesiado contendo agregados de proteínas patogênicas, que causam neuroinflamação e ativação de astrócitos, levando ao aumento da expressão de luciferase.

Remova o pelo da cabeça para evitar a dispersão da luz durante a geração de imagens.

Pinte as orelhas com um marcador não irritante para bloquear a bioluminescência inespecífica.

Pegue um volume apropriado de luciferina com base no peso corporal do camundongo e injete-o por via intraperitoneal.

A luciferina entra na corrente sanguínea, atinge o cérebro e é absorvida por astrócitos ativados.

Dentro do astrócito, a luciferase oxida a luciferina, emitindo um sinal bioluminescente.

Defina os parâmetros de imagem e posicione com precisão o mouse na placa de aquecimento da câmara de imagem de bioluminescência.

Garanta o fluxo adequado da anestesia e capture o sinal bioluminescente pela duração desejada.

Em seguida, selecione a região de interesse e quantifique o sinal bioluminescente alvo.

A intensidade desse sinal corresponde à atividade da luciferase, refletindo a ativação astrocítica e fornecendo uma medida direta da neuroinflamação.

Antes da imagem, raspe e depile as cabeças de camundongos anestesiados com isoflurano. Pinte as orelhas de preto com um marcador não irritante para bloquear a bioluminescência inespecífica. Pese os animais antes da injeção e, em seguida, calcule o volume exato de d-luciferina injetável a 150 mg / kg de peso corporal.

Injete por via intraperitoneal o volume calculado de d-luciferina e, em seguida, retorne cada animal à câmara de anestesia. Inicie o software de imagem. Depois que o sistema de imagem atingir sua temperatura operacional, inicialize o sistema clicando no botão inicializar no painel de controle e, em seguida, selecione a luminescência e a fotografia do botão.

Defina o tempo de exposição para 60 segundos, o binning para médio, o f-stop para 1 e o ganho EM para desligado. Selecione bloquear e, em seguida, abrir e, em seguida, sob a altura do assunto da guia, escolha 1,50 no menu suspenso. 10 minutos após a injeção com D-luciferina, coloque os animais na placa de aquecimento na câmara de imagem, e garantir que seus músculos estejam corretamente posicionados na saída de anestesia.

Mude o fluxo de isoflurano da câmara de inalação para a câmara de imagem e feche adequadamente a porta da câmara de imagem. Clique no botão adquirir para medir a bioluminescência, que leva 60 segundos.