Marcação retrógrada de neurônios motores de Drosophila usando corantes lipofílicos fluorescentes

Comece com um embrião de Drosophila dissecado fixado em uma lâmina de vidro com fita adesiva ao redor.

Os neurônios motores da mosca são marcados com fluorescência para visualização.

Usando um microscópio, visualize o embrião e posicione uma micropipeta preenchida com corante lipofílico fluorescente verde perto do embrião.

Em seguida, mude para o modo de fluorescência e localize a ponta axonal do neurônio motor na junção neuromuscular, onde o neurônio motor se conecta ao músculo.

Mude para o modo de campo claro, entre em contato com a ponta do axônio alvo com a pipeta, libere uma gota de corante e incube.

Devido à sua natureza lipofílica e vizinhança axonal, os corantes entram seletivamente na membrana rica em lipídios do axônio-alvo.

Com o tempo, o corante viaja retrógrado, movendo-se para trás ao longo da bicamada lipídica axonal em direção ao corpo neuronal, rotulando as projeções neuronais.

Remova a fita da lâmina e coloque uma lamínula.

Observe a lâmina sob um microscópio confocal.

O neurônio-alvo retrógrado aparece em fluorescência verde, exibindo morfologia e projeções neuronais detalhadas.

Use uma agulha de vidro sob um microscópio de dissecção para arrastar o embrião da membr