Imagem confocal do movimento mitocondrial dentro de oligodendrócitos em culturas organotípicas de fatias cerebrais

Comece com uma configuração de câmara de banho de microscópio confocal com uma solução de imagem circulante e temperatura controlada.

Pegue uma membrana polimérica hidrofílica contendo uma fatia de cérebro de camundongo organotípica na qual os oligodendrócitos foram transduzidos para expressar uma proteína fluorescente vermelha específica da mitocôndria e uma proteína fluorescente verde específica do citosol.

A fluorescência dupla permite uma visualização clara da dinâmica mitocondrial dentro do citosol do oligodendrócito.

Mergulhe a fatia no centro da banheira e prenda-a com uma âncora de harpa.

Abaixe a objetiva e selecione um oligodendrócito saudável para digitalização.

Ajuste a potência do laser para minimizar a toxicidade celular e o fotobranqueamento.

Defina os parâmetros do microscópio e registre imagens de lapso de tempo de mitocôndrias marcadas com fluorescência.

Capture imagens z-stack em diferentes profundidades para obter uma visão tridimensional de alta resolução de toda a célula.

Processe as imagens para visualizar o movimento mitocondrial dentro do oligodendrócito.

Use uma pinça para transferir o confete com a fatia da placa de Petri para o topo do banho. Em seguida, coloqu